干货|THP-1分化成巨噬细胞诱导攻略

发布时间：2024-10-12 浏览次数：75

THP-1细胞是一种人类单核细胞白血病细胞系，常用于研究免疫学和炎症反应。在实验中，THP-1细胞可以通过特定的刺激剂（如PMA，即磷酸酰肌醇）分化为巨噬细胞，这一过程广泛应用于以下几个场景：

1.免疫研究：通过分化后的巨噬细胞，可以研究其在免疫反应中的作用，如细胞因子的分泌、吞噬作用和抗原呈递能力。

2. 炎症模型：分化后的巨噬细胞可以用于研究炎症相关疾病的机制，例如检测不同刺激物（如病原体、细菌毒素等）对巨噬细胞活性的影响。

3. 药物筛选：在药物开发过程中，分化后的THP-1巨噬细胞可用于评估新药物对巨噬细胞功能或炎症反应的影响，从而筛选潜在的治疗药物。

4. 基因表达研究：利用分化的巨噬细胞可以研究各种基因在巨噬细胞中的表达情况，特别是与免疫应答和炎症反应相关的基因。

5. 疾病模型研究：分化的THP-1细胞可以用于构建各种人类疾病模型，特别是与血液、免疫系统和感染相关的疾病。

6. 细胞信号通路研究：研究不同刺激如何影响巨噬细胞内的信号传导通路，揭示背后的生物机制。

通过这些应用，THP-1细胞分化为巨噬细胞的实验为基础生物医学研究提供了重要的模型和视角。

Fig.Abbkine THP-1（人单核细胞白血病细胞）

产品名称	货号	规格
THP-1（人单核细胞白血病细胞）	BMC2108	1×10⁶cells/T25培养瓶

机理

细胞因子刺激是一种常见的THP-1细胞诱导分化方法。IL-4和IL-13等细胞因子能够促使THP-1细胞分化为巨噬细胞，并启动特定的信号通路，进而调控细胞功能。这种方法可以模拟体内的免疫调节过程，并提供一种便捷的方式来研究巨噬细胞在炎症反应、免疫调节和抗肿瘤等方面的功能。

巨噬细胞被分为两种主要类型：M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞。THP-1细胞通常用佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞，然后在PMA仍然存在的情况下：

加入脂多糖(LPS)、IFN-γ(诱导浓度：20 ng/mL)培养48h，诱导其向M1极化；

加入IL-4(诱导浓度：20 ng/mL)、IL-13(诱导浓度：20 ng/mL)培养48h，诱导其向M2极化；

最后，在无刺激物和无PMA的情况下，用无血清RPMI-1640基础培养基重悬细胞，可保持72h。

诱导步骤

THP-1诱导分化成巨噬细胞实验步骤：

（1）THP-1细胞的培养：更多培养技巧可查看THP-1细胞说明书。

（2）诱导培养基的配置：向1640完全培养基（含胎牛血清）里加入PMA（诱导浓度：100 ng/mL）制成诱导培养基；

（3）接种细胞：收集THP-1细胞并进行计数，用诱导培养基重悬细胞沉淀调整细胞密度为5*10⁵/mL，将细胞种入六孔板，每孔加入细胞悬液2mL；

（4）诱导培养：48h后，显微镜下观察巨噬细胞构建成功；

诱导成功的标志：单核细胞THP-1用PMA诱导后，由悬浮式生长变成贴壁生长，由圆形变成不规则形态，体积进一步增大，细胞浆疏松，细胞核增大明显，可见大量明显细胞器，胞膜周围可见少量突起。

用PMA孵育THP-1细胞48h，显示THP-1(40X)在(A)诱导前(B)诱导后的形态学变化。它们的形态由圆形变为细长和扁平。

图片来自网络

巨噬细胞进一步诱导成M1型实验步骤：

（1）诱导培养基的配置：向1640完全培养基（含胎牛血清）里加入PMA（诱导浓度：100 ng/mL）、脂多糖(LPS)(诱导浓度：100ng/mL)、IFN-γ(诱导浓度：20ng/mL)，制成诱导培养基；

（2）诱导培养：将已经诱导成的巨噬细胞上清弃除，加入诱导培养基（6孔板，每孔2 mL）培养48h，诱导其向M1极化。48h后，显微镜下观察M1细胞是否构建成功；

（3）最后，在无刺激物和无PMA的情况下，用无血清RPMI-1640基础培养基重悬细胞，可保持72h。

巨噬细胞进一步诱导成M2型实验步骤：

（1）诱导培养基的配置：向1640完全培养基（含胎牛血清）里加入PMA（诱导浓度：100 ng/mL）、加入IL-4(诱导浓度：20 ng/mL)、IL-13(诱导浓度：20 ng/mL)制成诱导培养基；

（2）诱导培养：将已经诱导成的巨噬细胞上清弃除，加入诱导培养基（6孔板，每孔2 mL）培养48h，诱导其向M2极化。48h后，显微镜下观察M2细胞是否构建成功；

（3）最后，在无刺激物和无PMA的情况下，用无血清RPMI-1640基础培养基重悬细胞，可保持72h。